【摘要】

目的：探讨蜂胶（propolis）对乳鼠心肌细胞氧化损伤的作用及其可能机制。方法：建立乳鼠心肌细胞过氧化氢（H2O2）损伤模型，通过观察细胞形态及细胞存活率，检测培养液中乳酸脱氢酶（乳酸脱氢酶）活性、超氧化物歧化酶（SOD）活性及脂质过氧化产物丙二醛（丙二醛）的含量，观察不同浓度蜂胶（50、100、200mg/L）对乳鼠心肌细胞氧化损伤的影响。

结果：不同浓度的H2O2（50、100、200、400、800μmol/L）孵育乳鼠心肌细胞4h后，心肌细胞存活率随H2O2浓度增加而降低，呈剂量依赖性；细胞形态出现明显损伤改变，心肌细胞伪足回缩、体积变小、自律搏动减弱。与模型组比较，经蜂胶预处理心肌细胞培养上清液中乳酸脱氢酶释放量、丙二醛生成量降低，SOD活性提高；细胞存活率显著改善，差异有统计学意义（P＜0.05）。

结论：蜂胶对H2O2所致的乳鼠心肌细胞氧化损伤有明显的保护作用，其机制可能是通过抑制脂质过氧化，增强心肌细胞膜抗氧化能力所致，至于其确切机制有待进一步探讨。

蜂胶（propolis）是蜜蜂从胶原植物幼芽、树皮上采集的树脂类物质，混以蜜蜂上颚腺、蜡腺分泌物。近年来，研究发现蜂胶主要有广谱抗菌、抗炎症、抗肿瘤等作用，对心血管系统疾病、糖尿病亦有治疗作用。体内外实验均表明，蜂胶具有显著的抗氧化活性，能清除自由基，提升抗氧化酶活性，抑制脂质过氧化。但是，蜂胶对H2O2所致的乳鼠心肌细胞损伤的相关作用，尚未见报道。皖南医学院拟以H2O2复制乳鼠心肌细胞损伤模型，用不同剂量蜂胶孵育，探讨蜂胶对心肌细胞氧化损伤的作用及可能机制，为蜂胶在临床应用提供实验依据。

氧化应激损伤在心肌缺血、心肌再灌注损伤及心力衰竭等病变中都起着重要的作用。心肌细胞缺氧时，ATP生成减少，分解增多，导致ADP、AMP增加，后者降解为次黄嘌呤，而次黄嘌呤正是产生氧自由基（oxygenderivedfreeradical，氧自由基）的底物。在氧供不足时，黄嘌呤脱氢酶可在钙依赖蛋白酶的作用下迅速转化为黄嘌呤氧化酶，为氧自由基的产生做好准备。氧自由基具有强烈引发脂质过氧化作用，可引发链式脂质过氧化反应，它们几乎可以同任何细胞成份发生反应，从而达到损伤细胞的目的。正常情况下有少量氧自由基生成并无大碍，细胞内存在SOD，过氧化氢酶（catalase，CAT）以及谷胱甘肽过氧化物酶（glutathioneperoxidase，GSHps），这些酶能及时将体内过剩的氧自由基还原成水而被清除，但是当氧自由基的产生量超过了其清除能力时就会引发自由基损伤。

实验采用外源性给予H2O2诱导乳鼠心肌细胞的氧化应激性损伤。H2O2是一种活性氧，其氧化能力很强。外源性H2O2作用于心肌细胞后产生大量氧自由基，后者介导的脂质过氧化反应是导致心肌细胞（尤其生物膜）损伤的重要原因。

乳酸脱氢酶是胞内酶，少量漏出即提示细胞膜通透性增高，漏出量的多少可反映细胞膜的受损程度；SOD是一种存在于细胞液中的抗氧化酶，可清除超氧阴离子，保护细胞免受超氧阴离子损伤，其值高低间接反映了机体清除氧自由基的能力；丙二醛是氧自由基攻击生物膜不饱和脂肪酸的终产物，其数值的高低可间接反映细胞受自由基损伤程度。

实验结果显示，H2O2能使培养液中乳酸脱氢酶、丙二醛明显升高，SOD活性显著降低，同时心肌细胞形态损伤明显，细胞伪足回缩，体积变小，自律搏动减弱；且心肌细胞存活率明显降低，证实H2O2的心脏毒性作用与脂质过氧化损伤有关。

蜂胶具有广泛的药理活性，对心肌损害、缺血再灌注损伤等有保护作用，可能与其较强的抗氧化作用有关。实验结果显示3种剂量蜂胶预处理，均能减轻H2O2诱导的乳酸脱氢酶释放量增加和丙二醛含量增加；呈剂量依赖性防止H2O2诱导的SOD活性降低，细胞存活率升高，细胞形态学指标亦有显著改善。